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western blot步骤
请问有谁知道核酸引物和探针PAGE纯化的
步骤
???
答:
2、操作
步骤
(如图20-2):图20-2
Western
Blot
装置图(1)用已制备好的SDS-PAGE分离的蛋白凝胶。(2)用一张滤纸,剪成与胶同样大小,在转移电泳缓冲液中预湿,放在Scotch-Brit Pad上,在胶的阴性端放上滤纸,胶的表面用该缓冲液浸湿,排出所有气泡。(3)在胶的阳极面放置同样大小浸湿的硝酸纤维素膜,排出气泡,再在...
western
blot
如何定量测定细胞中某蛋白表达量?
答:
Western
blot
(蛋白质印迹法)通常用于定性分析蛋白质的存在以及研究它们在不同条件下的表达变化。其大致
步骤
如下:1.样品制备:使用合适的裂解缓冲液将细胞裂解,并使用蛋白质浓度测定方法(例如BCA或Bradford法)测定蛋白质总浓度。2.SDS-PAGE:根据预期的蛋白大小选择适当的凝胶,并加载相同量的总蛋白至各...
SDS-PAGE和
western
-
blot
有区别吗
答:
前一个只是把蛋白进行电泳分析,主要用于蛋白纯度分析及分子量分析,主要用于定性;后者则是在前者的基础上又经过了转膜及杂交等
步骤
,用于分析特定蛋白的表达多少的。
western
blot
孵育一抗的时候可以同时孵育多个一抗么?
答:
有哪些背景。所以除非这个实验1.对楼主来说是要大量进行,重复进行的,摸清条件就可以大规模应用了;或者2.楼主样本太过珍惜,得到的量无法做足够多个
western
blot
实验,必须在一张膜上得到尽可能多抗体的结果,否则算上优化用的精力和费用,一般不值得做。
western
blot
加一抗前忘了封闭会有什么后果?
答:
对你的目的条带影响不大 不过可能有会杂带 而且背景会不干净 不可能完全没影响 不然何必多这么个一小时的
步骤
western
blot
内参 actin 是43还是45 kda
答:
另外,蛋白质定量以后进行电泳时需要等量上样,此
步骤
也存在操作误差。在
Western
Blot
实验时使用内参,即可简便地对定量和上样步骤产生的误差进行校正。在Western Blot中使用内参其实就是在WB过程中另外用内参对应的抗体检测内参,这样在检测目的产物的同时可以检测内参的表达,由于内参在各组织和细胞中的表达...
生物实验室
western
blot
曝光为什么总曝不出来
答:
2、转膜结束后,丽春红染色是否有条带出现。连蛋白都没有的话,自然不可能有结果。3、抗体是否正确。一抗、二抗的选择,以及抗体的效价,抗体失活、错误都不会有结果。可以做一个dot
blot
测试一下。4、显色液必须为新鲜配制。1:1的buffer和显色底物,然后加上千分之一的双氧水。(或者你用什么公司...
悬赏300分:我想做northern
blot
,谁帮我设计一下?
答:
步骤
:SDS-PAGE电泳 按照胶配置方法配制不同浓度PAGE胶,电泳置染料抵达分离胶底部,断开电源。 取下凝胶,
Western
Blot
1. 电泳结束后,切下带有要转移蛋白泳道的凝胶用,右下角作一标记以确定方向及正反面。2. 剪1块与凝胶大小相同的NC膜(不能大于凝胶),右下角作一标记,浸泡于转移缓冲液...
Western
blot
内参跑不齐怎么调整
答:
第三,PAGE胶的制备也很关键。看到条带信号连在一起,一方面因为胶不好,样品扩散,另一方面蛋白表达量 高,曝光时间长。第四,转膜的效率会不会是不一致的,一抗、二抗的接合GAPDH不好。都有可能。第五,本人在发文章做WB的时候也是做过很多次,每次都是不一样的结果。因为WB中间的
步骤
太多,影...
Western
Blot
为什么必须要用内参
答:
要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot。因为
WesternBlot
操作相对简单方便,既可以定性分析表达产物,同时还可以指示目的蛋白量的相对变化。虽然,顺利的时候WesternBlot做起来很简单,可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、结果出现多条带...
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